Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) , también llamado inmunoensayo enzimático , procedimiento bioquímico en el que se utiliza una señal producida por una reacción enzimática para detectar y cuantificar la cantidad de una sustancia específica en una solución. Los ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) se utilizan típicamente para detectar antígenos , aunque también se pueden utilizar para detectar otras sustancias, como anticuerpos , hormonas y drogas. Los ELISA son sensibles y específicos, además de relativamente económicos, lo que los hace útiles como herramientas de diagnóstico preliminar. Los ELISA se utilizan ampliamente, por ejemplo, en virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y aplicaciones similares.
ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas Un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) que se realiza en un laboratorio. hakat / Fotolia
prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas Un microbiólogo de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU. prepara muestras de sangre para usar con una prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) con la esperanza de desarrollar métodos para la detección rápida de antígenos del VIH. James Gathany / Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC)
Un aspecto clave de un ELISA es que los anticuerpos selectivos para la sustancia de interés se fijan a una superficie sólida (por ejemplo, los pocillos de una placa de poliestireno multipocillo). La solución a analizar se agrega a los pocillos, seguido de la adición de un conjugado anticuerpo-enzima. Luego, la placa se lava suavemente para eliminar el conjugado enzimático no unido y se agrega el sustrato de la enzima (la sustancia que modifica). Enzima que se ha unido a anticuerpo en los pozos reaccionarán, produciendo un producto coloreado que puede detectarse y medirse mediante espectrofotometría.
Existen numerosas formas de diseñar un ELISA. Por ejemplo, mientras que un ensayo puede usarse para evaluar la presencia de un antígeno en una muestra, se puede diseñar otra para detectar la presencia de un anticuerpo. En el primer caso, se usa un anticuerpo específico para el antígeno para revestir una superficie y se agrega una muestra que posiblemente contenga el antígeno. En el segundo caso, la superficie se recubre con el antígeno y se agrega la muestra a analizar para detectar la presencia de anticuerpo. En cualquier escenario, se utiliza un anticuerpo secundario ligado a enzima para detectar la formación de complejos antígeno-anticuerpo. Un tercer enfoque es un ELISA competitivo, en el que se agregan complejos antígeno-anticuerpo a pocillos marcados con antígeno, seguido de la adición de un anticuerpo secundario que es específico para el anticuerpo inicial utilizado.
